摘自《中國(guó)醫(yī)藥報(bào)》記者吳曉川

中藥鑒定是中藥學(xué)中的一個(gè)關(guān)鍵學(xué)科，它在鑒別中藥品種、評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)等方面有著不可替代的作用。近日，記者從北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定研討班上獲悉，隨著新技術(shù)的引入和多學(xué)科的交叉發(fā)展，中藥鑒定學(xué)已經(jīng)走出了外觀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別等老方法的局限，發(fā)展出了基因鑒別法、生物效應(yīng)鑒別法、紅外指紋圖譜法和RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA)技術(shù)等新方法，為制定中藥現(xiàn)代化標(biāo)準(zhǔn)和中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了有力的工具。

準(zhǔn)確無(wú)誤中藥復(fù)方基因鑒定法

基因技術(shù)，無(wú)疑是當(dāng)今科學(xué)的熱點(diǎn)。把基因技術(shù)用于中藥鑒定也是熱門(mén)課題。北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥生藥系主任張貴君教授介紹說(shuō)，中藥的品質(zhì)鑒定是中醫(yī)藥研究的基礎(chǔ)，選擇最佳的方法和手段鑒定、評(píng)價(jià)中藥是新藥開(kāi)發(fā)的重要環(huán)節(jié)?，F(xiàn)在中藥鑒定面臨著許多新問(wèn)題，如中藥樣品和數(shù)據(jù)信息庫(kù)的建立、中藥鑒定體系和模式的確定，以及研究體系的問(wèn)題等。這些問(wèn)題的核心就是要求中藥鑒定要講清楚其專(zhuān)屬性的鑒別特征和客觀的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)及方法。以往在中成藥方面，人們利用中藥鑒定的關(guān)鍵技術(shù)對(duì)中藥復(fù)方質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)的工作做得較少，在質(zhì)量評(píng)價(jià)方面忽視了中藥材及其復(fù)方鑒定特征的相關(guān)性。張貴君教授認(rèn)為，由于中藥絕大部分是以復(fù)方和成藥形式進(jìn)入臨床，對(duì)復(fù)方的質(zhì)量鑒定研究非常重要，中藥鑒定必須注重藥材和復(fù)方的相關(guān)性。

張教授對(duì)復(fù)方的基因鑒定是在對(duì)單味動(dòng)物中藥材基因鑒定的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。此前，他們成功地完成了“蜈蚣等5種動(dòng)物類(lèi)中藥18SrRNA基因酶切鑒定的初步研究”，為后面的復(fù)方研究提供了基礎(chǔ)。他們用PCR法(聚合酶鏈反應(yīng))與酶切法，發(fā)現(xiàn)利用限制性內(nèi)切酶EcoRⅡ可以一次性鑒別出5種動(dòng)物性中藥，篩選出4個(gè)有鑒別意義的內(nèi)切酶。在此基礎(chǔ)上，他們進(jìn)一步以“小兒抽風(fēng)散”為載體，運(yùn)用基因鑒定法研究中藥復(fù)方鑒別技術(shù)，通過(guò)對(duì)用量較多的節(jié)肢類(lèi)動(dòng)物藥遺傳標(biāo)記特征的提煉、整合研究，確立其專(zhuān)屬性的評(píng)價(jià)指標(biāo)和數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)對(duì)5種動(dòng)物藥材18SrRNA基因片段序列分析，設(shè)計(jì)了5種藥材的特異性引物。其鑒定結(jié)果表明，這5種合成的引物都能特異性地將復(fù)方中5種藥材鑒別出來(lái)，且具有專(zhuān)屬性。這一方法能在粉末性中成藥中檢測(cè)出有無(wú)指定的動(dòng)物藥成分的存在，不會(huì)因?yàn)橛猩倭緿NA污染而對(duì)鑒定結(jié)果的正確性產(chǎn)生影響。張教授以此為例說(shuō)明，由于中成藥的組分及成分很復(fù)雜，干擾因素多，用傳統(tǒng)中藥鑒定方法鑒定像玉屏風(fēng)散、大活絡(luò)丹、龜鱉膠囊等中藥制劑的真?zhèn)渭凹兌扔休^大難度，而基因鑒定法能準(zhǔn)確地鑒別出其中的微量中藥成分，是一種很有潛力新方法。快速無(wú)損紅外和拉曼光譜法

在研討班上，快人快語(yǔ)的清華大學(xué)分析中心副主任孫素琴以她的中藥紅外和拉曼圖譜引起了大家的關(guān)注。自稱不懂中藥的孫素琴是個(gè)紅外光譜分析專(zhuān)家，談起紅外光譜分析來(lái)如數(shù)家珍。據(jù)她講，原來(lái)的中藥鑒定方法，如色譜法、紫外光譜法和紅外光譜法都要做許多復(fù)雜的前處理工作，而經(jīng)過(guò)處理的中藥難以保持原來(lái)中藥的特性，對(duì)最終圖譜影響很大。她現(xiàn)在找到的這種紅外和拉曼光譜法則不用復(fù)雜的前處理，可快速測(cè)定中藥材，并借助模式識(shí)別技術(shù)(光譜聚類(lèi)和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等)，最后能識(shí)別出不同產(chǎn)地、野生與栽培的同種藥材，初步建立了一種快速鑒別中藥材道地性和真?zhèn)蝺?yōu)劣的檢測(cè)系統(tǒng)。

孫素琴介紹說(shuō)，光譜法對(duì)中藥進(jìn)行的快速、無(wú)損分析將在中藥的質(zhì)量控制中扮演一個(gè)重要的角色。中藥材是多種成分的混合物，其紅外和拉曼光譜是中藥材所含各成分光譜的疊加，只要所含化學(xué)成分不同，各成分含量的比例不同，就會(huì)導(dǎo)致紅外和拉曼圖譜的差異。

對(duì)于不同產(chǎn)地、野生以及栽培的同一種中藥材，盡管其紅外和拉曼圖譜相似但再采甩計(jì)算機(jī)模式識(shí)別技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)地研究，仍可以達(dá)到分類(lèi)識(shí)別的目的。在紅外和拉曼檢測(cè)過(guò)程中，樣品無(wú)需分離提取，中藥材的主體成分(纖維素、淀粉、揮發(fā)油、多糖、生物堿等)并不干擾藥材的鑒別，相反與某些有效成分相結(jié)合會(huì)增強(qiáng)圖譜的識(shí)別能力。另外，從中醫(yī)藥的觀點(diǎn)看，指標(biāo)成分的控制，難以真正控制中藥功效。中醫(yī)辨證施治用的是藥味而非某個(gè)化學(xué)成分。所以要控制中藥功效，不能只針對(duì)某個(gè)化學(xué)成分，必須對(duì)方劑物質(zhì)群整體予以控制。而中藥內(nèi)含物質(zhì)群復(fù)雜，要把質(zhì)量控制建立在研究清楚每個(gè)內(nèi)合成分的基礎(chǔ)上是相當(dāng)困難的。這就需要在尚不清楚全體化學(xué)成分的情況下，實(shí)現(xiàn)對(duì)整體的控制。紅外和拉曼光譜可以最大限度地獲取中藥材的信息。與此同時(shí)，她引入了化學(xué)計(jì)量學(xué)的方法，通過(guò)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)和應(yīng)用數(shù)學(xué)方法及計(jì)算機(jī)技術(shù)，最大限度地抽取不同特性樣本中的定性、定量化學(xué)信息，為紅外和拉曼光譜法用于定性定量分析，提供了現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)。

在研究中，孫素琴首先用紅外和拉曼光譜法對(duì)大量藥材進(jìn)行了研究，建立了包括紅外圖譜庫(kù)(1000種)、拉曼圖譜庫(kù)(200種)的紅外／拉曼圖譜庫(kù)，對(duì)未知的中藥材和中成藥，通過(guò)光譜檢索，根據(jù)分子光譜的指紋圖譜判斷真?zhèn)巍Ｔ趯?duì)不同產(chǎn)地、野生和栽培的赤芍、白芍圖譜分析的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同中藥材所含化學(xué)成分及含量存在差異的特點(diǎn)，用光譜一聚類(lèi)分析法將不同樣本在化學(xué)

成分及含量上的差異反映出來(lái)，將差異的信息轉(zhuǎn)化為計(jì)算機(jī)的數(shù)量化特征，用聚類(lèi)分析的數(shù)學(xué)方法進(jìn)行分類(lèi)決策。她所做的“芍藥屬、黃芩、玄參三種藥材的聚類(lèi)分析”、“牡丹：栽培與野生的聚類(lèi)分析”、“黃芩：栽培與野生的聚類(lèi)分析”結(jié)果表明，同屬同種的藥材由于受藥材品種、收加工、產(chǎn)地的地理及氣候條件等多種因素影響，藥材總體化學(xué)成分會(huì)有差異，相對(duì)含量也有所不同，而這些差別都會(huì)引起光譜的細(xì)微區(qū)別。利用化學(xué)計(jì)量學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，從光譜中提

取這些差異信息，可以達(dá)到同屬同種藥材道地性檢驗(yàn)鑒別的目的。

在數(shù)據(jù)處理上，她運(yùn)用了人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(ANN)理論，做了“栽培、野生和粘毛黃芩紅外光譜的ANN識(shí)別法產(chǎn)地”等研究，開(kāi)發(fā)出“紅外指紋圖譜庫(kù)與陣列相關(guān)系數(shù)比對(duì)軟件”，用于分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)表明，采用陣列相關(guān)系數(shù)閾值控制法，可以正確鑒別未知黃芩樣品的產(chǎn)地。對(duì)江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的7個(gè)白術(shù)樣品進(jìn)行的比對(duì)分析表明，陣列相關(guān)系數(shù)能明顯反映生、白術(shù)的差異，判斷白術(shù)炮制的程度。

通過(guò)以上一系列研究表明，對(duì)同種藥材不同產(chǎn)地，野生與栽培品種可憑借譜線增強(qiáng)技術(shù)進(jìn)行鑒別。同時(shí)，各藥材所富含的化學(xué)成分和有效成分與分子光譜有很大的相關(guān)性，結(jié)合模式識(shí)別技術(shù)可對(duì)藥材進(jìn)行光譜聚類(lèi)，還可以尋找類(lèi)同品和代用品，開(kāi)發(fā)新藥源。

靈敏專(zhuān)一生物效應(yīng)鑒定法

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定室的王秀坤所做的“腦神經(jīng)系統(tǒng)抑制性遞質(zhì)γ一氨基丁酸受體中藥活性成分研究”，將受體理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)引向中藥鑒定研究領(lǐng)域，從受體角度鑒定法。

王秀坤認(rèn)為，在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，以中藥的歸經(jīng)、功能主治為線索，通過(guò)高效液相、液一質(zhì)聯(lián)用、氣一質(zhì)聯(lián)用等現(xiàn)代分離分析手段和放射性配體、受體結(jié)合分析法研究中藥活性成分對(duì)機(jī)體生物分子的作用，可以建立國(guó)際承認(rèn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)、控制方法。王秀坤介紹，受體研究是當(dāng)代生命科學(xué)中最活躍的領(lǐng)域之一，也是藥量學(xué)和分子生物學(xué)迅猛發(fā)展的領(lǐng)域之一。中藥有效無(wú)效最終要由它對(duì)生物體的作用來(lái)評(píng)價(jià)，利用生物效應(yīng)評(píng)判中藥質(zhì)量?jī)?yōu)劣是一種新興的中藥鑒定方法。

中藥生物效應(yīng)鑒定法的目的是通過(guò)受體與中藥的作用，搞清中藥的組成成分、結(jié)構(gòu)性質(zhì)、體內(nèi)活性和藥效，闡明有效中藥的作用機(jī)制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥質(zhì)量和療效的科學(xué)化、規(guī)范化評(píng)價(jià)。生物效應(yīng)分析高度、靈敏、專(zhuān)一，同時(shí)又具備快速、微量、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，一天內(nèi)可同時(shí)做數(shù)十種受體，測(cè)試幾百個(gè)樣品，所得親和力數(shù)據(jù)對(duì)定量構(gòu)效關(guān)系的計(jì)算很有價(jià)值。生物效應(yīng)分析法能使中藥鑒定直接服務(wù)于臨床、服務(wù)于現(xiàn)代化的中藥新藥的研制開(kāi)發(fā)。

當(dāng)前，中藥鑒定學(xué)同中醫(yī)藥研究一樣，正在吸引著越來(lái)越多的不同專(zhuān)業(yè)的科學(xué)家投身其中，越來(lái)越多的新技術(shù)手段和科學(xué)工具也被廣泛地應(yīng)用到中藥鑒定研究中來(lái)。可以看出，中藥鑒定技術(shù)的發(fā)展，其研究?jī)?nèi)容巳從種間差異深入到種內(nèi)差異；研究深度從細(xì)胞生物學(xué)向分子生物學(xué)發(fā)展，并且在器官、組織、細(xì)胞、分子各個(gè)水平，全方位展開(kāi)；研究學(xué)科由醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)向物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、數(shù)學(xué)等多學(xué)科滲透；研究技術(shù)不斷地推陳出新；研究方法學(xué)追求標(biāo)準(zhǔn)化、快速化、信息化?？梢灶A(yù)見(jiàn)，中藥鑒定學(xué)將同中醫(yī)中藥一起在新的世紀(jì)里取得長(zhǎng)足的發(fā)展，煥發(fā)出無(wú)限生機(jī)。